一、PCR引物设计原则

二、Primer Premier 5.0软件设计引物

Primer Premier是由Premier公司开发的、专业用于PCR引物及杂交探针的和评估的系列软件，基本上目前引物设计都是基于Primer系列，如ncbi在线引物设计是基于Primer 3。

三、引物设计步骤 ①输入序列：安装好软件后，首先打开软件，左上角来操作，file-new-dna sequence，这一项可以把复制的序列粘贴进去，也可以选择另一个file-open-dna sequence去open一个新的文件。②点击Primer进入引物设计界面。③点击引物设计界面上的search按钮进行搜索选项设定。④点击搜索选项界面上的OK按钮可得到引物设计结果。⑤选择分值高的引物对作为实验合成引物选项。⑥根据需要对引物进行编辑。